细胞浆和细胞核蛋白提取试剂盒
基本信息
46002
储存条件：4℃保存，3-6个月；-20℃保存，12个月
细胞浆和细胞核蛋白提取试剂盒
详细说明
本公司制备的细胞浆和细胞核蛋白提取试剂盒可用于从细胞或新鲜组织中提取细胞浆和细胞核蛋白，提取到的蛋白可用于后续Western Blot、酶活力测定、EMSA等实验，简单高效，提取过程只需要实验室常规仪器。以下操作对应6孔板： 1.收集细胞：对于贴壁细胞，收集前用预冷的PBS洗2次，每孔（80%-90%细胞融合度）加入500 uL PBS，然后用细胞刮刮下细胞，离心去上清，细胞沉淀冰浴待用（如果用胰酶消化收集细胞，应尽可能将胰酶去除干净，以防胰酶降解目的蛋白）；对于悬浮细胞，离心去上清，沉淀用PBS洗2次，去除PBS后，细胞沉淀冰浴待用。
2.细胞沉淀加入100 uL 细胞浆提取试剂A，用移液器将细胞沉淀轻柔吹打混匀，冰浴10分钟。 3.4℃ 4500 rpm离心5分钟，将上清①转移至新的离心管（注意不要吸入沉淀），沉淀①冰浴待用。上清①4℃ 14000 rpm离心20分钟，再将此步离心后的上清②转移至新的预冷的离心管，即为细胞浆蛋白，此步离心后的沉淀②可弃去。 4.沉淀①（细胞核成份）中加入150 uL 细胞浆提取试剂A，用移液器将沉淀①轻柔吹打混匀洗涤，4℃ 4500 rpm离心5分钟，尽可能将上清弃干净，此步骤重复3次。 5.第4步洗涤后的沉淀中加入50 uL细胞核提取试剂B，涡旋振荡混匀，冰浴30分钟，每隔5分钟，涡旋振荡10 s-15 s，4℃ 14000 rpm离心10 分钟。 6.将上清转移至新的预冷的离心管，即为细胞核蛋白。注意事项： 1.本产品细胞浆提取试剂A不含蛋白酶抑制剂，细胞核提取试剂B不含除金属蛋白酶抑制剂以外的其它蛋白酶抑制剂，可根据实验需求在步骤2和步骤5的细胞浆提取试剂A以及细胞核提取试剂B中自行选择加入合适的蛋白酶抑制剂。 2.本产品仅供科研使用 3.为了您的健康，请穿防护服并戴手套操作
2.细胞沉淀加入100 uL 细胞浆提取试剂A，用移液器将细胞沉淀轻柔吹打混匀，冰浴10分钟。 3.4℃ 4500 rpm离心5分钟，将上清①转移至新的离心管（注意不要吸入沉淀），沉淀①冰浴待用。上清①4℃ 14000 rpm离心20分钟，再将此步离心后的上清②转移至新的预冷的离心管，即为细胞浆蛋白，此步离心后的沉淀②可弃去。 4.沉淀①（细胞核成份）中加入150 uL 细胞浆提取试剂A，用移液器将沉淀①轻柔吹打混匀洗涤，4℃ 4500 rpm离心5分钟，尽可能将上清弃干净，此步骤重复3次。 5.第4步洗涤后的沉淀中加入50 uL细胞核提取试剂B，涡旋振荡混匀，冰浴30分钟，每隔5分钟，涡旋振荡10 s-15 s，4℃ 14000 rpm离心10 分钟。 6.将上清转移至新的预冷的离心管，即为细胞核蛋白。注意事项： 1.本产品细胞浆提取试剂A不含蛋白酶抑制剂，细胞核提取试剂B不含除金属蛋白酶抑制剂以外的其它蛋白酶抑制剂，可根据实验需求在步骤2和步骤5的细胞浆提取试剂A以及细胞核提取试剂B中自行选择加入合适的蛋白酶抑制剂。 2.本产品仅供科研使用 3.为了您的健康，请穿防护服并戴手套操作